Материалы для исследования кори

Корь – высококонтагиозное антропонозное острое инфекционное заболевание с воздушно-капельным путем передачи. Возбудитель кори – РНК содержащий вирус (семейство Paramyxoviridae, род Morbillivirus). Только 1% восприимчивых лиц не заболевает корью при первом тесном контакте с больным.

Корь начинается с продромального периода, для которого характерны повышение температуры тела до 38°С и выше, кашель, насморк, чихание, покраснение глаз и светобоязнь, энантема в полости рта (пятна Филатова-Коплика). С 4-5 дня болезни наблюдается поэтапное высыпание пятнисто-папулезной сыпи (на первый день сыпь появляется на лице и шее, на второй день – на туловище, на третий день – на ногах и руках), на месте сыпи остается пигментация и отрубевидное шелушение. Инкубационный период длится в среднем около 10 дней (от 7 до 18 дней) с момента инфицирования дыхательных путей и до повышения температуры.

Несмотря на наличие доступных высокоиммуногенных вакцин, корь все еще остается одной из основных причин детской смертности в развивающихся странах и периодически приводит к возникновению крупных вспышек в индустриально развитых странах. В 2010-2011 годах крупные вспышки кори были зарегистрированы в ряде стран Африки, Юго-Восточной Азии и Европы (Франция, Германия, Болгария, Румыния). Особенно тревожная ситуация сложилась в 2012 году на Украине, где за три месяца заболело более 10000 человек. В Российской Федерации, большинство административных территорий которой в январе 2011 года были сертифицированы на отсутствие эндемичной кори, ситуация осложнилась в 2011-2012 годах в Южном и Северокавказском Федеральных округах, в Москве, Санкт-Петербурге и ряде других городов.

Вирус кори присутствует в крови, носоглоточных выделениях и моче во время продромального периода и в течение 3-4 дней с момента появления сыпи. АТ к вирусу кори впервые можно обнаружить в крови с момента появления сыпи. Максимальный уровень содержания АТ IgM в крови приходится на 4-7 дни после появления сыпи, они сохраняются в течение 28 дней, в редких случаях их можно обнаружить спустя 8 недель с момента появлении сыпи. АТ IgG начинают вырабатываться с момента появления сыпи и достигают максимального уровня через 2 недели; их можно выявить в течение долгих лет после перенесенной инфекции.

Показания к обследованию. Больные с диагнозом «корь», «корь ?» и с другими клиническими диагнозами, имеющие пятнисто-папулезную сыпь и температуру тела 37,5°С и выше.

Дифференциальная диагностика. Заболевания, протекающие с мелкопятнистой экзантемой (краснуха, скарлатина, инфекционный мононуклеоз, лекарственные и аллергические экзантемы, протекающие с повышением температуры тела).

Этиологическая лабораторная диагностика включает выделение вируса кори, выявление РНК вируса кори, обнаружение АТ к вирусу кори.

Материал для исследования

Сыворотка крови – выявление АТ;
моча, назофарингиальные смывы, лимфоциты периферической крови – выделение вируса кори;
мазки из носоглотки и ротоглотки – выявление РНК вируса.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Лабораторная диагностика коревой инфекции в рамках Программы элиминации кори в РФ проводится только в вирусологических лабораториях Региональных центров по эпидемиологическому надзору за корью с помощью тест-систем, рекомендованных ВОЗ. Для лабораторной диагностики кори применяют главным образом выявление АТ к вирусу (серологическая диагностика). Для диагностики кори используют как обнаружение АТ отдельных классов (IgM и IgG), так и количественное определение специфических АТ в крови для установления их значимого прироста при одновременном исследовании двух проб, полученных от больного в остром периоде и в период реконвалесценции (парные сыворотки).

Для выявления вирусоспецифических АТ IgM и IgG в настоящее время используется преимущественно метод ИФА. Благодаря высокой чувствительности и специфичности, простоте и скорости выполнения, возможности автоматизации исследования, метод доступен любой лаборатории. Для получения корректных результатов и облегчения их интерпретации большое значение имеет правильно выбранное по отношению к появлению клинических симптомов кори время забора образца.

Для выявления изменения уровня суммарных АТ с использованием реакции нейтрализации (РН) цитопатического действия вируса кори, требуется наличие двух образцов сыворотки крови, взятых у больного в остром периоде заболевания и на стадии реконвалесценции. Метод обладает 100% чувствительностью по отношению к клинически подтвержденным случаям. Этот тест не является легким в применении, потому что он требует наличия высококвалифицированного персонала, имеющего опыт работы с культурами клеток. Результаты анализа могут быть получены через 10 дней после получения сыворотки реконвалесцента.

Оценка изменения содержания специфических АТ с использованием метода РТГА также требует наличия двух образцов сыворотки крови, полученных у больного в остром периоде и на стадии реконвалесценции. У вакцинированных лиц метод демонстрирует 98% чувствительность. Этот тест также не является легким в применении, потому что требует высококвалифицированного персонала, а также наличие свежих эритроцитов обезьян. Результаты анализа могут быть получены через 2 дня после получения сыворотки реконвалесцента.

Выделение вируса кори выполняют на культуре клеток Vero. Обнаружение и идентификация вируса кори на культуре клеток может занять несколько недель, поэтому не рекомендуется использовать этот метод для первичной диагностики инфекции, изоляция вируса кори проводится в специализированных лабораториях.

Выявление РНК вируса методом ПЦР с обратной транскрипцией не получило пока широкого распространения. Секвенирование генома вируса кори применяется в целях определения генотипа возбудителя кори. Генетический анализ позволяет сравнивать штаммы, полученные из различных мест в разные годы, что позволяет получить информацию о происхождении вирусов и проследить пути их передачи.

Показания к применению различных лабораторных исследований. Для диагностики кори ВОЗ рекомендует использовать обнаружение вирус-специфических IgM методом ИФА в образце сыворотки крови, взятом после четвертого дня от момента появления сыпи. Взятие крови для исследований осуществляется на 4-7 день с момента появления сыпи.

При выявлении АТ IgМ к вирусу кори у пациентов с лихорадкой и пятнистопапулезной сыпью, обследуемых в рамках активного эпидемиологического надзора за корью, дополнительно проводится исследование для выявления АТ IgG методом ИФА в «парных сыворотках». Взятие крови для исследований осуществляется на 4-7 день с момента появления сыпи (1-я сыворотка) и не ранее чем через 10-14 дней от даты взятия первой пробы (2-я сыворотка).

Для определения напряженности иммунитета к вирусу кори ВОЗ рекомендует применять выявление АТ IgG в сыворотке крови методом ИФА.

Для выявления вируса кори и его РНК используют биоматериалы, взятые в продромальный период заболевания и в первые три дня после появления сыпи. При взятии образцов следует учитывать, что интенсивность экскреции вируса быстро падает.

Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Вирусоспецифические АТ IgM появляются в течение первых дней с момента высыпания, спустя месяц их уровень начинает быстро снижаться. Их наличие в крови пациента достоверно свидетельствует об острой свежей инфекции. АТ IgM также вырабатываются при первичной вакцинации и, хотя их уровень снижается быстрее, чем уровень АТ IgM, вырабатывающихся в ответ на инфицирование диким вирусом, специфические АТ IgM к дикому или вакцинному вирусу не могут быть разделены используемыми в рутинной диагностике методами. В этом случае для интерпретации полученных результатов следует обратиться к истории вакцинации конкретного пациента.

Поскольку исследование АТ IgM методом ИФА обладает максимальной чувствительностью между 4-м и 28-м днями от момента появления сыпи, то исследование образца крови, полученного в эти сроки, считается адекватным для диагностики кори. Повторное взятие образца крови может понадобиться в случае отрицательного результата выявления АТ IgM в первом образце крови, полученном в течение первых трех дней от момента появления сыпи. Повторное взятие крови для выявления АТ IgG выполняют через 10-14 дней после взятия первого. Нарастание титра специфических АТ IgG в 4 и более раза при одновременном исследовании обеих проб с использованием стандартных тестов является основанием для постановки диагноза «корь».

Источник

Для постановки диагноза корь зачастую необходимо лабораторное
подтверждение инфекции. Самое лучшее время для сдачи анализов — первый контакт
пациента с врачом. Врача необходимо вызывать на дом, так как корь — это заразное
заболевание и поход в поликлинику может стать причиной заражения многих восприимчивых
детей и взрослых. Забор материала для исследования может выполнить врач или
медсестра, которую доктор может прислать чуть позже.

1 больной корью может заразить 12—18 восприимчивых человек [1]. Подробнее в статье «Как можно заразиться корью?».

Стандартом лабораторной диагностики кори в большинстве стран
являются серологическое исследование и ПЦР-диагностика.

1. Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Суть метода заключается в идентификации РНК вируса кори в крови,
слизи носоглотки/ротоглотки, бронхиальном секрете или моче.

ПЦР-исследование рекомендуется проводить как можно раньше после
появления сыпи, так как количество вируса в организме снижается с течением
времени. Наиболее информативным является период первых 1—3—7 дней от начала
высыпаний [2—5]. В литературе имеются сведения о том, что у некоторых пациентов
вирус кори может определяться в носоглоточном секрете до 10—14 дня болезни [5].

Для наиболее точной диагностики рекомендуется производить забор
материала из трех разных локусов (кровь, мазок из носоглотки или ротоглотки и
моча). Это повышает вероятность правильного диагноза [4,5].

После забора материала для ПЦР (мазок и моча) допустимо его хранение
до 1 суток в холодильнике (4 °С), возможно замораживание. Если для исследования
используется моча, то ее объем должен быть не менее 10 мл, но лучше 50 мл. Утренняя
первая моча содержит максимальное количество вируса [4].

Отрицательный результат ПЦР не исключает диагноза кори [6].

Ложноотрицательный результат может быть получен при позднем заборе
материала (более 3—7 дней с момента появления сыпи), предшествующей недавней
вакцинации против кори, при нарушениях хранения и/или транспортировки образцов
[4,5].

В соответствии с международными рекомендациями при выполнении ПЦР
желательно определять генотип вируса кори. Это необходимо для четкого
различения происхождения вируса (дикий штамм или вакцинный), учета
распространения вируса по земному шару и происхождения очагов/вспышек
заболевания [4].

На сегодняшний день известно 24 генотипа вируса кори. Большинство
из них вышло из циркуляции, однако менее 10 из них (по данным ВОЗ — 6 [7]) все еще присутствуют на нашей планете [8].

2. Серологический метод.

Метод заключается в определении специфических антител (IgM и IgG) против вируса кори в сыворотке крови.

Для верификации диагноза кори достаточно определить один класс
антител IgM или IgG. Каковы особенности анализа?

— IgM.

IgM определяется в крови в течение 1 месяца (28 дней [3]) у больного
корью после появления высыпаний. Пик IgM отмечается
на 7—10 сутки от момента появления сыпи, а затем количество антител постепенно
снижается. Через 6—8 недель от начала сыпи IgM уже может не
определяться [9].

Если больной ранее прививался против кори (1 или 2 прививки) то
при реинфекции вирусом кори IgM у него может не определяться
вовсе или быть повышенным только короткий промежуток времени, который трудно
зафиксировать [6].

Отрицательный анализ на IgM не исключает наличие заболевания у ранее привитых.

В некоторых случаях у ранее не привитых пациентов IgM может быть ложноотрицательными
(около 20—25% проб). Это характерно для образцов, взятых в первые 72 часа от
начала появления сыпи. Дело в том, что концентрация антител в первые дни
болезни еще мала и недостаточна для определения [10,11].

Если результат был отрицательным и сыпь присутствует более 72
часов должен быть выполнен повторный анализ (допустимо выполнить анализ до 10
дня болезни) [6].

Читайте также: Лекция корь и краснуха

Кроме того, ложноотрицательный результат может быть получен, если анализ выполнен позже 28 дней с момента появления сыпи.

Ложноположительный результат возможен при проведенной ранней
вакцинации против кори (в течение предшествующих 6 недель до появления сыпи), наличии
повышенного ревматоидного фактора, при сопутствующих острых воспалительных
заболеваний [5].

В каждом отдельном случае проводится изучение течения заболевания,
особенностей пациента и/или дополнительная диагностика.

Наряду с определением IgM / IgG для диагностики кори, также настоятельно рекомендуется выполнять ПЦР [12].

Положительный анализ на IgM только при
наличии характерной клинической картины и данных о контакте с больным
корью свидетельствует об остром течении коревой инфекции. Положительный
анализ на IgM при отсутствии характерной клинической картины или контакта с
больным корью не является основанием для постановки диагноза. В таких случаях
рекомендуется выполнить ПЦР исследование [3].

— IgG.

Определение IgG является информативным анализом
для подтверждения кори в случае отсутствия возможности провести ПЦР
исследование и/или когда IgM является отрицательным или
сомнительным [6].

Исследование проводится в парных сыворотках: первый анализ должен
быть выполнен в первые 4—7 дней от начала высыпаний, второй — в течение 10—30
дней после первого [2,3].

IgG достигают пика через 4 недели от начала сыпи [9].

Положительным результат считается, если:

— произошла сероконверсия (в первом анализе IgG
отрицательны, во втором — положительны);

— отмечается значительное (в 4 и более раз) повышение уровня IgG.

Сероконверсия не является информативной при недавно проведенной
вакцинации (в течение предшествующих 6 недель).

Ранее вакцинированные, получившие две прививки и не выработавшие
защитных антител (такое встречается, но очень редко), при заболевании корью
могут не иметь повышение IgG в 4 раза при втором анализе IgG по сравнению
с первым [3]. Отрицательное значение IgG в двух
анализах исключает наличие коревой инфекции.

ИФА — метод, одобренный ВОЗ для определения IgG и IgM для диагностики коревой инфекции [10].

3. Вирусологический метод.

Для идентификации вируса кори иногда может применяться вирусологический метод. Суть его заключается в том, что вирус, полученный от больного, культивируется в клеточной культуре. Этот метод является особо точным, но занимает около двух недель. Вирусологический метод не рекомендуется для рутинного обследования при подозрении на корь [2,5,6,8].

Источник

Диагностика кори с использованием клинико-эпидемиологических данных является ведущей на современном этапе. Специфическая диагностика (выделение и идентификация вируса) имеет вспомогательное значение. Серологические методы исследования используются для ретроспективной диагностики кори. На сегодняшний день средства специфической терапии заболевания отсутствуют. Симптоматическое лечение кори оказывает положительное влияние на течение заболевания.

Рис. 1. На фото корь у детей.

Диагностика кори

Диагностика кори на основании эпидемиологических данных

При сборе анамнеза заболевания уточняется, болел или нет больной корью в прошлом (корь у лиц, ранее перенесших заболевание, протекает в атипичной форме).
Уточняется, вакцинирован или нет ребенок от кори (факт вакцинации позволяет практически полностью исключить заболевание).
Определяется факт нахождения больного в контакте с больным корью.

Диагностика кори с применением клинического метода

Клинический метод диагностики заболевания в современных условиях является ведущим. Из множества симптомов кори опорными в клинической диагностике следует считать:

Острое начало заболевания.
Нарастающие симптомы насморка, кашля и конъюнктивит (триада Стимсона).
При кори на слизистой оболочке щек, десен, губ и реже конъюнктивы появляются очаги энантемы, имеющей вид мелких, белого цвета точек, которые окружены гиперемированным венчиком (пятна Бельского-Филатова—Коплика). Этот симптом появляется только при кори и позволяет в ранние сроки диагностировать заболевание.
Одновременное, с повторным повышением температуры (вторая волна лихорадки), поэтапное появление сыпи, которая располагается на фоне неизмененных кожных покровов. Сыпь склонна к слиянию, а в стадии завершения заболевания отмечается пигментация и шелушение.

Рис. 2. Пятна Бельского-Филатова-Коплика на слизистой щек и коревая энантема в области неба — опорные симптомы в клинической диагностике кори.

Рис. 3. Конъюнктивит, отечность нижних век и поэтапное появление сыпи — важные симптомы при клинической диагностике кори.

Рис. 4. Сыпь, склонная к слиянию и пигментации — важный диагностический признак заболевания.

Диагностика кори с использование микроскопического метода исследования

Метод простой микроскопии

При кори в местах, где скапливаются лимфоциты, образуются гигантские клетки Уортина-Финкельдея. Они содержат огромное число ядер (от 50 до 100) и мелкие включения, локализующие в цитоплазме и ядрах. При кори такие клетки образуются в миндалинах, лимфоузлах, тимусе, селезенке и аппендиксе. Их можно выявить в мазках, взятых со слизистой оболочки ротоглотки, мокроты и носовой слизи в первые два дня периода высыпания.

Рис. 5. На фото гигантские многоядерные клетки Уортина-Финкельдея.

Метод люминесцентной микроскопии

С целью обнаружения гигантских клеток применяется метод люминесцентной микроскопии мазков-отпечатков, взятых со слизистой оболочки носовой полости. Мазки окрашиваются акридиновым оранжевым, что позволяет увидеть ярко-красное свечение гигантских многоядерных клеток.

Рис. 6. Применение метода люминесцентной микроскопии при диагностике кори.

Диагностика кори с использованием серологических методов исследования

Благодаря серологическим исследованиям выявляются и изучаются антитела и антигены в сыворотке крови больного. В их основе лежат иммунные реакции организма. Специфичность данного вида исследования не достигает 100%, поэтому результаты серологический реакций оцениваются только с учетом клинической картины заболевания.

Диагностика кори на поздних сроках заболевания осуществляется с помощью реакций агглютинации: РПГА, РНГА и РА. В основе таких реакций лежит способность корпускулярных антигенов склеиваться с помощью антител. Диагноз кори подтверждается, если нарастание титров антител через 2 — 3 недели будет в 4 раза выше, по сравнению с титрами антител, определяемых в первые дни заболевания.
Иммуноферментный анализ (ИФА) — чувствительный, специфичный и относительно недорогой тест. Для его проведения используются белковые антигены вирусов кори, с помощью которых измеряются сывороточные иммуноглобулины класса M, уровень которых повышаются в крови в первые 7 — 10 дней от начала заболевания в 8 — 10 раз.

Вирусологическая диагностика кори

В обычной лабораторной практике метод выделения вирусов и их идентификация не применяются, хотя обнаружить возбудителей кори можно за 2 — 3 дня до начала стадии высыпания. Материалом для исследования может стать кровь больного и выделения из носоглотки.

Диагностика кори с применением экспресс-диагностики

Экспресс-методы лабораторной диагностики кори позволяют за несколько минут определить антигены, локализованные в цитоплазме эпителиальных клеток дыхательных путей. Антигены, меченные флуорохромами, издают специфическое свечение при воздействии ультрафиолетовых лучей люминесцентного микроскопа. При использовании реакции непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) врач может получить результаты уже через 2 — 6 часов.

Дифференциальная диагностика кори

Постановка диагноза типично протекающей кори не представляет трудностей. Выраженный конъюнктивит, отек нижних век, катар верхних дыхательных путей, коревая энантема и наличие пятен Бельского-Филатова-Коплика — основные симптомы заболевания в начальном, катаральном периоде. Проводить дифференциальную диагностику в этот период следует с ОРЗ и гриппом.

В период высыпания корь необходимо дифференцировать с заболеваниями, протекающими с сыпью: краснухой, ветрянкой, скарлатиной, инфекционной эритемой Розенберга и Чамера, энтеровирусной и медикаментозной экзантемой, сывороточной болезнью, синдромом Стивенса-Джонсона.

Рис. 7. Схематическое расположение элементов сыпи при разных инфекционных заболеваниях.

Рис. 8. На фото сыпь при краснухе. Она появляется и распространяется по всему телу уже в первый день заболевания. Не имеет сливного характера, как при кори. После себя не оставляет пигментации и шелушения.

Рис. 9. Сыпь при скарлатине мелкоточечная, располагается на гиперемированном фоне, что создает картину эритемы. Сыпь покрывает все тело за исключением области носогубного треугольника, сгущается в области естественных складок кожи. После исчезновения сыпи начинается шелушение кожи.

Рис. 10. На фото инфекционная эритема. Сыпь яркая, группируется в кольца, бледная по центру.

Рис. 11. Сыпь при ветрянке носит генерализованный характер. Ее основными элементами являются розеолы (розовые пятнышки) и везикулы (пузырьки наполненные жидкостью).

Рис. 12. Энтеровирусная экзантема.

Рис. 13. На фото сыпь при сывороточной болезни.

Рис. 14. На фото сыпь при синдроме Стивенса-Джонсона. Язвенно-некротические поражения локализуются вокруг носа, глаз, рта, заднего прохода и половых органов. На коже туловища превалируют большие буллезные элементы.

Диагностика кори у ранее привитых детей

Если в организме ребенка сохранилось небольшое количество антител, то при заражении коревыми вирусами, заболевание у них будет протекать в стертой форме. Инкубационный период при стертом течении удлинен, отсутствуют типичные признаки заболевания, течение стертое, нарушена морфология и этапность высыпаний.

к содержанию ↑

Лечение кори

Лечение кори в условиях стационара

При тяжелом и осложненном течении заболевания больные госпитализируются. Таким детям требуется высококвалифицированная медицинская помощь. Госпитализации также подлежат больные, постоянно пребывающие в закрытых коллективах.

В условиях стационара лечение направлено на борьбу с интоксикацией, воспалением, аллергией и шоком. При присоединении вторичной инфекции назначаются антибактериальные препараты. Противокоревой иммуноглобулин для лечения заболевания не применяется. Он вводится только с профилактической целью.

Лечение кори в домашних условиях

При неосложненном течении кори лечение больного организуется в домашних условиях под постоянным наблюдением участкового врача. Уход за больным и организация правильного полноценного питания занимает первостепенное место в комплексе лечебных мероприятий.

Кровать больного должна находиться в таком положении, чтобы дневной свет не попадал больному в глаза. В вечернее время искусственный свет не должен раздражать глаза больного.
На весь лихорадочный период и в последующие 2 — 3 дня назначается постельный режим.
Ларингит и явления тяжелого изнуряющего кашля служат показанием для увлажнения воздуха в помещении. Увлажнение можно обеспечить путем развешивания в комнате больного влажных простыней или применения увлажнителей воздуха.
Ребенок должен получать достаточное количество жидкости, включая фруктовые соки, морсы и минеральную воду.
В острый период пища должна быть полужидкой, легкоусвояемой, богатой витаминами и соответствовать возрасту больного.

Уход за глазами, полостью рта и носа

Глаза больного промываются 3 — 4 раза в день, для чего используются теплая кипяченая вода или 2% раствор натрия гидрокарбоната. После этого в глаза необходимо закапать по 1 — 2 капли 20% раствора сульфацил-натрия.

Нос очищается ватным тампоном, смоченным в теплом вазелиновом масле. При массивном образовании корочек в нос закапывают 2 — 3 капли вазелинового масла 3 — 4 раза в сутки.

Ротовая полость очищается после каждого приема пищи, для чего рот либо ополаскивается кипяченой водой, либо ребенку после еды дают попить кипяченую воду.

Рис. 15. Уход за глазами, полостью рта и носа — обязательный компонент ухода за больным корью ребенком.

Патогенетическое и симптоматическое лечение кори

Патогенетическая и симптоматическая терапия заболевания направлена на нормализацию температуры тела, борьбу с кашлем и аллергией.

Учитывая роль аллергического компонента в развитии заболевания, обязательным является назначение антигистаминных препаратов — Димедрола, Пипольфена, Тавегила или Супрастина.
При упорном кашле назначаются отхаркивающие средства. Показаны ингаляции со щелочными растворами, муколитиками и бронхолитиками. Из физиотерапевтических методов лечения показаны микроволновая и УВЧ-терапия на область грудной клетки.