Тест система ифа краснуха

Описание

И Н С Т Р У К Ц И Я по применению набора реагентов  «ИФА-Краснуха-IgM» Тест-система иммуноферментная для выявления антител  класса M к вирусу краснухи

Регистрационное удостоверение  № ФСР 2012/13239. от 20 марта 2012 г.

НАЗНАЧЕНИЕ[1]

Выявление и определение титра видоспецифических антител класса M к вирусу краснухи в сыворотке (плазме) крови человека методом иммуноферментного анализа (ИФА) на твердофазном носителе в варианте «capture» при «ручной» постановке и с использованием ИФА-анализаторов.

СОСТАВ И БАЗОВАЯ КОМПЛЕКТАЦИЯ НАБОРА

Примечания. 1. Набор включает все реагенты, необходимые для постановки ИФА, кроме очищенной (дистиллированной или деионизированной) воды.

2. ФСБ-Т(х25), РИ, стоп-реагент – унифицированы для всех наборов ЗАО «ЭКОлаб», в которых используются указанные реагенты.

Дополнительно набор может быть укомплектован:

вспомогательными пластиковыми емкостями (4 шт.),

стрипированным планшетом для предварительного разведения образцов
(1 шт.),

одноразовыми наконечниками для автоматических пипеток (16 шт.),

клейкой пленкой для планшетов (4 шт.).

Компоненты набора упакованы в коробку, в коробку вложена инструкция по применению и бланк калибровочного графика.

По желанию потребителя базовая комплектация набора (число индивидуальных упаковок с реагентами и их объемы) может быть изменена.

ОСНОВНЫЕ ПОТРЕБИТЕЛЬСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Базовый вариант комплектации набора позволяет одномоментное исследование 96 образцов, включая контрольные (на контрольные образцы используется 6 лунок и 1 лунка – для определения уровня «бланк»). Предусмотрена возможность проведения раздельных исследований с использованием необходимого количества стрипов:

ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ

При наличии в исследуемом образце антител класса M к вирусу краснухи антитела, сорбированные на поверхности лунок полистиролового планшета, связываются с IgM антителами сыворотки крови. Конъюгат – антиген вируса краснухи, меченный пероксидазой хрена, связывается с IgM-антителами, специфическими к вирусу краснухи. Присутствие в сыворотке специфических IgG-антител, ревматоидного фактора и антинуклеарных антител потенциально не оказывает  влияния на результаты реакции. Образовавшийся комплекс «антитело-антитело-конъюгат» выявляется по реакции с субстратом пероксидазы – тетраметилбензидином, в результате которой меняется цвет (оптическая плотность) реакционной смеси в лунке планшета; изменение регистрируется с помощью спектрофотометра.

АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Аналитическая чувствительность (минимальный титр IgМ-антител к вирусу краснухи, выявляемый набором) – 1:100.

Набор рассчитан на определение титра антител класса M к вирусу краснухи в диапазоне от 1:100 до 1:800.

Коэффициент вариации ОП контрольных сывороток (К+ и К+пор) – не более 10 %.

ИССЛЕДУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Нативная сыворотка (плазма) крови человека объемом не менее 10 мкл.

Образцы сыворотки (плазмы) крови до исследования можно хранить не более 7 сут при температуре от 2 до 8 оС и 3 мес при температуре минус 20 оС или более низкой. Допускается только однократное замораживание-размораживание образцов. Размороженные образцы перед исследованием тщательно перемешать.

Не допускается использование для исследования образцов с повышенным содержанием липидов и (или) с признаками гемолиза, и (или) с видимым микробным проростом.

Образцы, содержащие осадок, перед анализом отцентрифугировать в течение 10-15  мин при 2500-3000 об/мин.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Набор биологически безопасен, однако с исследуемыми образцами необходимо обращаться как с потенциально инфицированным материалом.

Стоп-реагент при попадании на незащищенную кожу и слизистые может вызывать химические ожоги. В случае попадания на кожу – немедленно промойте пораженный участок водой.

Класс потенциального риска применения в медицинских целях по ГОСТ Р 51609-2000 – 2б.

СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ

Оборудование и материалы (для «ручной» постановки)

Дозаторы пипеточные (пипетки полуавтоматические одно- и многоканальные переменного объема) для внесения реагентов в лунки планшета с погрешностью дозирования не более 5 % с наконечниками полипропиленовыми одноразовыми.

Ручные, или автоматические промыватели, или восьми- и двенадцатиканальные пипеточные дозаторы для промывания лунок планшета.

Спектрофотометр вертикального сканирования для измерения оптической плотности в лунках планшета при 450 нм и/или в двухволновом режиме при основной длине волны 450 нм и длине волны сравнения в диапазоне 620-650 нм.

Центрифуга лабораторная на 2,5-3,0 тыс. об/мин, термостат на 37 оС, холодильник бытовой, фильтровальная бумага.

Вода очищенная (дистиллированная или деионизированная).

70 %-ный раствор спирта этилового и 6 %-ный раствор перекиси водорода (дез.растворы) или растворы иных дезинфектантов, разрешенных к применению СП 1.32322-08, кроме хлорсодержащих.

Приготовление рабочих  растворов реагентов для ИФА

Перед работой извлечь набор из холодильника, вскрыть упаковку и выдержать все реагенты перед проведением анализа не менее 30 мин при температуре  от 18 до 25 оС.

Приготовление рабочих разведений исследуемых образцов

По 10 мкл каждого образца смешайте с 1 мл РРО (разведение 1:100), тщательно перемешайте пипетированием.

Для предварительного разведения образцов можно использовать вспомогательный планшет; для этого внести в необходимое число его лунок по 90 мкл РРО, затем внести в них по 10 мкл исследуемых образцов, тщательно перемешать пипетированием (разведение 1:10). Рабочее разведение (1:100) будет получено непосредственно в лунках иммуносорбента.

Рабочие разведения образцов хранить не более 3 ч при температуре  от 18 до 25 оС.

Приготовление рабочего промывочного раствора  (ФСБ-Т)

При выпадении осадка солей в ФСБ-Т(х25) прогреть его при температуре  37 оС до  полного растворения осадка.

При постановках с использованием ИФА-анализаторов 80 мл ФСБ-Т(х25) довести водой очищенной до 2 л.

При дробной «ручной» постановке использовать соотношения объемов ФСБ-Т(х25) и воды, указанные в табл. 1 для разного числа используемых стрипов.

Таблица 1

Готовый рабочий промывочный раствор хранить при температуре от 2 до 8 ºС не более 14 сут.

Приготовление остальных реагентов

Иммуносорбент, К+, К–, К+пор, РРО, конъюгат, РИ, стоп-реагент – готовы к применению.

После вскрытия упаковок неиспользованные реагенты (кроме иммуносорбента) хранить в плотно закрытой упаковке при температуре  от 2 до 8 оС до истечения срока годности.

Проведение ИФА («ручная» постановка)

Внимание! Соблюдение указанных ниже температуры и времени инкубации планшетов на каждой стадии постановки крайне важно для получения достоверных результатов.

1. Извлечь рамку планшета с необходимым числом стрипов. Неиспользованные стрипы из вскрытого пакета хранить в плотно закрытом пакете при температуре от 2 до 8 оС до истечения срока годности.
2. Одну лунку (напр., А1) оставить незаполненной.

Внести (соблюдая указанную последовательность):

в две лунки (напр., B1, C1) – по 100 мкл К+,

в две лунки (напр., D1, E1) – по 100 мкл К+пор,

в две лунки (напр., F1, G1) – по 100 мкл К—,

в следующие лунки — по 100 мкл подготовленных исследуемых образцов (по 1 лунке на образец). При использовании вспомогательного планшета для разведения образцов в соответствующие лунки иммуносорбента внести по 90 мкл РРО, а затем – по 10 мкл образцов, разведенных 1:10 в лунках вспомогательного планшета, тщательно перемешать пипетированием.

Накрыть планшет липкой пленкой .

3. Инкубировать 60 мин при температуре 37оС в защищенном от света месте.
4. С помощью промывателя удалить образцы из лунок, 4 раза промыть планшет промывочным раствором, внося в лунки 350-370 мкл раствора. При наличии промывателя, позволяющего производить промывку в режиме «Overflow», использовать именно этот режим. По окончании промывки удалить остатки влаги из лунок, постукивая планшетом по фильтровальной бумаге, положенной на полиэтиленовую пленку.

При ручной отмывке заполненные ФСБ-Т лунки выдерживать не менее 1 мин.

5. Во все лунки (кроме лунки А1) внести по 100 мкл конъюгата.
6. Планшет закрыть клейкой пленкой. Инкубировать 30 мин при температуре 37 оС в защищенном от света месте.
7. С помощью промывателя удалить жидкость из лунок, 4 раза промыть планшет как указано в п. 4.

При ручной промывке промыть планшет 5 раз. Заполненные ФСБ-Т лунки выдерживать не менее 1 мин.

8. Во все лунки внести по 100 мкл раствора индикаторного, немедленно поместить планшет в защищенное от света место и выдержать 30 мин при температуре от 21 до 25 оС.
9. Во все лунки (в той же последовательности, с которой вносился индикаторный раствор внести по 100 мкл стоп-реагента, осторожно (постукиванием по планшету) перемешать содержимое лунок и не более чем через 10-15 мин приступить к учету результатов.

Регистрация и учет результатов

Результаты ИФА регистрировать спектрофотометрически, измеряя оптическую плотность (ОП) при двух длинах волн – 450 нм и 620-650 нм. При отсутствии референс-фильтра на 620-650 нм оптическую плотность (ОП) измерять при длине волны 450 нм. Оптический нуль фотометра («бланк») устанавливается против воздуха.

Результаты ИФА учитываются при следующих условиях:

среднее значение ОП(К+)  ≥0,50;

среднее значение ОП(К+пор) ≥0,20;

отношение ОП(К–)/ ОП(К+пор)  ≤0,50;

значение ОП «бланк»  ≤0,15;

среднее значение ОП(К–) ≤0,15.

В противном случае исследование необходимо повторить.

Качественный учет результатов

Исследуемые образцы учитываются:

как положительные при ОП >1,1× ОП(К+пор),

как отрицательные при ОП <0,9× ОП(К+пор).

Образцы с ОП в пределах от 0,9× ОП(К+пор) до 1,1× ОП(К+пор), т.е. в так называемой «серой» зоне, рекомендуется исследовать повторно, поскольку результаты, полученные в ней, не могут быть однозначно интерпретированы.

При повторном получении указанного результата, рекомендуется мониторинг наличия антител у пациента для исключения неспецифических реакций, которые также могут давать сомнительные результаты.

Полуколичественный учет результатов

В образцах, оцененных как положительные, может быть определен титр IgM-антител к вирусу краснухи, для чего  на бланке калибровочного графика по точкам, ординатами которых (пропорциональная шкала) служат полученные значения ОП(К+) и ОП(К+пор), а абсциссами (логарифмическая шкала) — значения титров IgM-антител в К+ и К+пор (1:800 и 1:100), следует провести прямую линию и найти на ней точку, ординатой которой является полученное значение ОП исследуемого образца; абсцисса указанной точки будет соответствовать искомому значению титра IgM-антител.

ПОСТАНОВКА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ИФА-АНАЛИЗАТОРОВ

Подготовить прибор в соответствии с инструкцией по его эксплуатации, ввести программу анализа, соответствующую используемому набору, и провести анализ.

СРОК ГОДНОСТИ

Срок годности набора – 1 год. Набор с истекшим сроком годности применению не подлежит.

ХРАНЕНИЕ И ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ

Хранение

В упаковке предприятия-изготовителя при температуре от 2 до 8 оС. Замораживание не допускается.

Транспортирование

При температуре от 2 до 8 оС. Замораживание не допускается. Допускается транспортирование при температуре от 9 до 25 оС в течение 10 сут.

УСЛОВИЯ ОТПУСКА

Для учреждений здравоохранения.

По вопросам, касающимся качества набора «ИФА-Краснуха-IgM», следует обращаться по адресу 142530 Московская обл., г. Электрогорск, ул. Буденного, д. 1, ЗАО «ЭКОлаб»; тел. (49643) 3-23-11, факс (49643) 3-30-93 – отдел сбыта, (49643) 3-37-30 – ОБТК  и в учреждение, уполномоченное Росздравнадзором на проведение государственного контроля качества указанной продукции.

КРАТКАЯ СХЕМА ПОСТАНОВКИ ИФА

(ИФА-Краснуха-IgM)

Май 2014 г.

[1]              Взамен инструкции, утвержденной 22.12.2006 г.

Скачать Инструкцию 

Скачать РУ

ИФА-Краснуха-IgМ