Лабораторные исследования на корь

Корь – высококонтагиозное антропонозное острое инфекционное заболевание с воздушно-капельным путем передачи. Возбудитель кори – РНК содержащий вирус (семейство Paramyxoviridae, род Morbillivirus). Только 1% восприимчивых лиц не заболевает корью при первом тесном контакте с больным.

Корь начинается с продромального периода, для которого характерны повышение температуры тела до 38°С и выше, кашель, насморк, чихание, покраснение глаз и светобоязнь, энантема в полости рта (пятна Филатова-Коплика). С 4-5 дня болезни наблюдается поэтапное высыпание пятнисто-папулезной сыпи (на первый день сыпь появляется на лице и шее, на второй день – на туловище, на третий день – на ногах и руках), на месте сыпи остается пигментация и отрубевидное шелушение. Инкубационный период длится в среднем около 10 дней (от 7 до 18 дней) с момента инфицирования дыхательных путей и до повышения температуры.

Несмотря на наличие доступных высокоиммуногенных вакцин, корь все еще остается одной из основных причин детской смертности в развивающихся странах и периодически приводит к возникновению крупных вспышек в индустриально развитых странах. В 2010-2011 годах крупные вспышки кори были зарегистрированы в ряде стран Африки, Юго-Восточной Азии и Европы (Франция, Германия, Болгария, Румыния). Особенно тревожная ситуация сложилась в 2012 году на Украине, где за три месяца заболело более 10000 человек. В Российской Федерации, большинство административных территорий которой в январе 2011 года были сертифицированы на отсутствие эндемичной кори, ситуация осложнилась в 2011-2012 годах в Южном и Северокавказском Федеральных округах, в Москве, Санкт-Петербурге и ряде других городов.

Вирус кори присутствует в крови, носоглоточных выделениях и моче во время продромального периода и в течение 3-4 дней с момента появления сыпи. АТ к вирусу кори впервые можно обнаружить в крови с момента появления сыпи. Максимальный уровень содержания АТ IgM в крови приходится на 4-7 дни после появления сыпи, они сохраняются в течение 28 дней, в редких случаях их можно обнаружить спустя 8 недель с момента появлении сыпи. АТ IgG начинают вырабатываться с момента появления сыпи и достигают максимального уровня через 2 недели; их можно выявить в течение долгих лет после перенесенной инфекции.

Показания к обследованию. Больные с диагнозом «корь», «корь ?» и с другими клиническими диагнозами, имеющие пятнисто-папулезную сыпь и температуру тела 37,5°С и выше.

Дифференциальная диагностика. Заболевания, протекающие с мелкопятнистой экзантемой (краснуха, скарлатина, инфекционный мононуклеоз, лекарственные и аллергические экзантемы, протекающие с повышением температуры тела).

Этиологическая лабораторная диагностика включает выделение вируса кори, выявление РНК вируса кори, обнаружение АТ к вирусу кори.

Материал для исследования

• Сыворотка крови – выявление АТ;
• моча, назофарингиальные смывы, лимфоциты периферической крови – выделение вируса кори;
• мазки из носоглотки и ротоглотки – выявление РНК вируса.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Лабораторная диагностика коревой инфекции в рамках Программы элиминации кори в РФ проводится только в вирусологических лабораториях Региональных центров по эпидемиологическому надзору за корью с помощью тест-систем, рекомендованных ВОЗ. Для лабораторной диагностики кори применяют главным образом выявление АТ к вирусу (серологическая диагностика). Для диагностики кори используют как обнаружение АТ отдельных классов (IgM и IgG), так и количественное определение специфических АТ в крови для установления их значимого прироста при одновременном исследовании двух проб, полученных от больного в остром периоде и в период реконвалесценции (парные сыворотки).

Для выявления вирусоспецифических АТ IgM и IgG в настоящее время используется преимущественно метод ИФА. Благодаря высокой чувствительности и специфичности, простоте и скорости выполнения, возможности автоматизации исследования, метод доступен любой лаборатории. Для получения корректных результатов и облегчения их интерпретации большое значение имеет правильно выбранное по отношению к появлению клинических симптомов кори время забора образца.

Для выявления изменения уровня суммарных АТ с использованием реакции нейтрализации (РН) цитопатического действия вируса кори, требуется наличие двух образцов сыворотки крови, взятых у больного в остром периоде заболевания и на стадии реконвалесценции. Метод обладает 100% чувствительностью по отношению к клинически подтвержденным случаям. Этот тест не является легким в применении, потому что он требует наличия высококвалифицированного персонала, имеющего опыт работы с культурами клеток. Результаты анализа могут быть получены через 10 дней после получения сыворотки реконвалесцента.

Оценка изменения содержания специфических АТ с использованием метода РТГА также требует наличия двух образцов сыворотки крови, полученных у больного в остром периоде и на стадии реконвалесценции. У вакцинированных лиц метод демонстрирует 98% чувствительность. Этот тест также не является легким в применении, потому что требует высококвалифицированного персонала, а также наличие свежих эритроцитов обезьян. Результаты анализа могут быть получены через 2 дня после получения сыворотки реконвалесцента.

Выделение вируса кори выполняют на культуре клеток Vero. Обнаружение и идентификация вируса кори на культуре клеток может занять несколько недель, поэтому не рекомендуется использовать этот метод для первичной диагностики инфекции, изоляция вируса кори проводится в специализированных лабораториях.

Выявление РНК вируса методом ПЦР с обратной транскрипцией не получило пока широкого распространения. Секвенирование генома вируса кори применяется в целях определения генотипа возбудителя кори. Генетический анализ позволяет сравнивать штаммы, полученные из различных мест в разные годы, что позволяет получить информацию о происхождении вирусов и проследить пути их передачи.

Показания к применению различных лабораторных исследований. Для диагностики кори ВОЗ рекомендует использовать обнаружение вирус-специфических IgM методом ИФА в образце сыворотки крови, взятом после четвертого дня от момента появления сыпи. Взятие крови для исследований осуществляется на 4-7 день с момента появления сыпи.

При выявлении АТ IgМ к вирусу кори у пациентов с лихорадкой и пятнистопапулезной сыпью, обследуемых в рамках активного эпидемиологического надзора за корью, дополнительно проводится исследование для выявления АТ IgG методом ИФА в «парных сыворотках». Взятие крови для исследований осуществляется на 4-7 день с момента появления сыпи (1-я сыворотка) и не ранее чем через 10-14 дней от даты взятия первой пробы (2-я сыворотка).

Для определения напряженности иммунитета к вирусу кори ВОЗ рекомендует применять выявление АТ IgG в сыворотке крови методом ИФА.

Для выявления вируса кори и его РНК используют биоматериалы, взятые в продромальный период заболевания и в первые три дня после появления сыпи. При взятии образцов следует учитывать, что интенсивность экскреции вируса быстро падает.

Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Вирусоспецифические АТ IgM появляются в течение первых дней с момента высыпания, спустя месяц их уровень начинает быстро снижаться. Их наличие в крови пациента достоверно свидетельствует об острой свежей инфекции. АТ IgM также вырабатываются при первичной вакцинации и, хотя их уровень снижается быстрее, чем уровень АТ IgM, вырабатывающихся в ответ на инфицирование диким вирусом, специфические АТ IgM к дикому или вакцинному вирусу не могут быть разделены используемыми в рутинной диагностике методами. В этом случае для интерпретации полученных результатов следует обратиться к истории вакцинации конкретного пациента.

Поскольку исследование АТ IgM методом ИФА обладает максимальной чувствительностью между 4-м и 28-м днями от момента появления сыпи, то исследование образца крови, полученного в эти сроки, считается адекватным для диагностики кори. Повторное взятие образца крови может понадобиться в случае отрицательного результата выявления АТ IgM в первом образце крови, полученном в течение первых трех дней от момента появления сыпи. Повторное взятие крови для выявления АТ IgG выполняют через 10-14 дней после взятия первого. Нарастание титра специфических АТ IgG в 4 и более раза при одновременном исследовании обеих проб с использованием стандартных тестов является основанием для постановки диагноза «корь».

Вирус кори относится к семейству Morbillivirus семейства парамиксовирусов. Вирусная частица содержит РНК, окруженную белковым капсидом и внешней белково-липидной оболочкой. Вирус способен связываться с клетками, несущими рецептор комплемента CD46.

Корь – высококонтагиозное заболевание. Ранее, до повсеместной вакцинации, она была одной из самых распространённых детских инфекций (преимущественно среди детей дошкольного и школьного возраста). Передача вируса происходит воздушно-капельным путем. Первоначально вирус размножается в слизистой, что сопровождается умеренной виремией. Затем с кровью попадает в лимфоидную ткань, в которой активно размножается, особенно в моноцитах. После этого происходит широкое распространение вируса, совпадающее с продромальным периодом (повышение температуры, недомогание). В это время (9 – 10 сутки от момента заражения) вирус выявляется практически во всех тканях, особенно в эпителии дыхательных путей и лимфоидной ткани. Появляется кашель, насморк, конъюнктивит, повышается температура. В течение последующих 5 – 6 суток, больные наиболее заразны. Во время появления характерной сыпи (примерно на 14-е сутки) репродукция вируса снижается, к 16-м суткам вирус уже может не выявляться. В это время в крови выявляются специфические антитела. С появлением сыпи симптомы достигают максимума, наиболее тяжёлое состояние отмечается на 2 – 4 сутки, когда сыпь охватывает всё тело. Нередко сыпь сопровождается головной болью, рвотой, болями в животе, поносом и болями в мышцах.

Выраженное увеличение лимфоузлов и селезёнки, появляющееся в первые дни болезни, может сохраняться несколько недель. В острой стадии болезни и после исчезновения сыпи могут развиваться вторичные осложнения, связанные с инвазией гноеродных бактерий в дыхательные пути. Возможно развитие среднего отита или бронхопневмонии. Самые тяжёлые осложнения кори – поражения центральной нервной системы (панэнцефалит).

У переболевших корью людей развивается пожизненный иммунитет. Вакцинация живой противокоревой вакциной также обеспечивает стойкий иммунитет, инактивированной – на 6 – 18 месяцев. В зрелом возрасте иммунитет против кори (вследствие перенесённого заболевания или вакцинации) имеют практически все. Корь у беременных встречается редко, она может вызвать преждевременные роды, самопроизвольный аборт, мёртворождение. Однако пороков развития плода не наблюдается. Новорожденные дети у матерей, имеющих иммунитет против кори, защищены от инфекции материнскими антителами, прошедшими в их кровь через плаценту, вплоть до 6 – 7-месячного возраста после рождения. Начиная со второго полугодия жизни, восприимчивость детей к заболеванию растет.

Лабораторная диагностика. В случае затруднений в диагностике по клинической картине заболевания, целесообразно использование серологическох тестов (исследование уровня в крови IgM и IgG антител к вирусу кори – в лаборатории ИНВИТРО тесты № 251 и № 250). Неспецифическим лабораторным признаком кори является лейкопения со снижением абсолютного количества нейтрофилов и выраженным снижением числа лимфоцитов в продромальном периоде и периоде высыпаний (в лаборатории ИНВИТРО тесты № 5, № 119).

Антитела класса IgG к вирусу кори появляются вслед за антителами класса IgM примерно через 2 недели после инфицирования. В ходе дальнейшего развития иммунного ответа их концентрация быстро растёт. Специфические антитела в крови можно выявить практически у всех больных корью уже ко 2 дню появления сыпи. Антитела класса IgG сохраняются после перенесённого заболевания обычно пожизненно. IgG против вируса кори выявляются также и после вакцинации. По их присутствию в крови можно судить о наличии иммунитета к этому заболеванию. В крови новорожденных до 6 – 7 месячного возраста могут выявляться материнские IgG антитела, полученные через плаценту из крови матери в период беременности (IgM антитела через плаценту не проходят). При повторном контакте с вирусом у иммунных лиц наблюдается быстрый рост титров высокоспецифичных IgG, что обеспечивает защиту от инфекции (клинических проявлений и выделения вируса при этом не наблюдается).

Литература

1. Инфекционные болезни у детей. Ред. Д. Марри. М. Практика, 2006. 928 с.
2. Материалы фирмы – производителя реагентов.
3. Jacobs D. et al. Laboratory test handbook/ Lexi-Comp./2002 – 1534 p.