Как берется кровь на корь

Корь – высококонтагиозное антропонозное острое инфекционное заболевание с воздушно-капельным путем передачи. Возбудитель кори – РНК содержащий вирус (семейство Paramyxoviridae, род Morbillivirus). Только 1% восприимчивых лиц не заболевает корью при первом тесном контакте с больным.

Корь начинается с продромального периода, для которого характерны повышение температуры тела до 38°С и выше, кашель, насморк, чихание, покраснение глаз и светобоязнь, энантема в полости рта (пятна Филатова-Коплика). С 4-5 дня болезни наблюдается поэтапное высыпание пятнисто-папулезной сыпи (на первый день сыпь появляется на лице и шее, на второй день – на туловище, на третий день – на ногах и руках), на месте сыпи остается пигментация и отрубевидное шелушение. Инкубационный период длится в среднем около 10 дней (от 7 до 18 дней) с момента инфицирования дыхательных путей и до повышения температуры.

Несмотря на наличие доступных высокоиммуногенных вакцин, корь все еще остается одной из основных причин детской смертности в развивающихся странах и периодически приводит к возникновению крупных вспышек в индустриально развитых странах. В 2010-2011 годах крупные вспышки кори были зарегистрированы в ряде стран Африки, Юго-Восточной Азии и Европы (Франция, Германия, Болгария, Румыния). Особенно тревожная ситуация сложилась в 2012 году на Украине, где за три месяца заболело более 10000 человек. В Российской Федерации, большинство административных территорий которой в январе 2011 года были сертифицированы на отсутствие эндемичной кори, ситуация осложнилась в 2011-2012 годах в Южном и Северокавказском Федеральных округах, в Москве, Санкт-Петербурге и ряде других городов.

Вирус кори присутствует в крови, носоглоточных выделениях и моче во время продромального периода и в течение 3-4 дней с момента появления сыпи. АТ к вирусу кори впервые можно обнаружить в крови с момента появления сыпи. Максимальный уровень содержания АТ IgM в крови приходится на 4-7 дни после появления сыпи, они сохраняются в течение 28 дней, в редких случаях их можно обнаружить спустя 8 недель с момента появлении сыпи. АТ IgG начинают вырабатываться с момента появления сыпи и достигают максимального уровня через 2 недели; их можно выявить в течение долгих лет после перенесенной инфекции.

Показания к обследованию. Больные с диагнозом «корь», «корь ?» и с другими клиническими диагнозами, имеющие пятнисто-папулезную сыпь и температуру тела 37,5°С и выше.

Дифференциальная диагностика. Заболевания, протекающие с мелкопятнистой экзантемой (краснуха, скарлатина, инфекционный мононуклеоз, лекарственные и аллергические экзантемы, протекающие с повышением температуры тела).

Этиологическая лабораторная диагностика включает выделение вируса кори, выявление РНК вируса кори, обнаружение АТ к вирусу кори.

Материал для исследования

• Сыворотка крови – выявление АТ;
• моча, назофарингиальные смывы, лимфоциты периферической крови – выделение вируса кори;
• мазки из носоглотки и ротоглотки – выявление РНК вируса.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Лабораторная диагностика коревой инфекции в рамках Программы элиминации кори в РФ проводится только в вирусологических лабораториях Региональных центров по эпидемиологическому надзору за корью с помощью тест-систем, рекомендованных ВОЗ. Для лабораторной диагностики кори применяют главным образом выявление АТ к вирусу (серологическая диагностика). Для диагностики кори используют как обнаружение АТ отдельных классов (IgM и IgG), так и количественное определение специфических АТ в крови для установления их значимого прироста при одновременном исследовании двух проб, полученных от больного в остром периоде и в период реконвалесценции (парные сыворотки).

Для выявления вирусоспецифических АТ IgM и IgG в настоящее время используется преимущественно метод ИФА. Благодаря высокой чувствительности и специфичности, простоте и скорости выполнения, возможности автоматизации исследования, метод доступен любой лаборатории. Для получения корректных результатов и облегчения их интерпретации большое значение имеет правильно выбранное по отношению к появлению клинических симптомов кори время забора образца.

Для выявления изменения уровня суммарных АТ с использованием реакции нейтрализации (РН) цитопатического действия вируса кори, требуется наличие двух образцов сыворотки крови, взятых у больного в остром периоде заболевания и на стадии реконвалесценции. Метод обладает 100% чувствительностью по отношению к клинически подтвержденным случаям. Этот тест не является легким в применении, потому что он требует наличия высококвалифицированного персонала, имеющего опыт работы с культурами клеток. Результаты анализа могут быть получены через 10 дней после получения сыворотки реконвалесцента.

Оценка изменения содержания специфических АТ с использованием метода РТГА также требует наличия двух образцов сыворотки крови, полученных у больного в остром периоде и на стадии реконвалесценции. У вакцинированных лиц метод демонстрирует 98% чувствительность. Этот тест также не является легким в применении, потому что требует высококвалифицированного персонала, а также наличие свежих эритроцитов обезьян. Результаты анализа могут быть получены через 2 дня после получения сыворотки реконвалесцента.

Выделение вируса кори выполняют на культуре клеток Vero. Обнаружение и идентификация вируса кори на культуре клеток может занять несколько недель, поэтому не рекомендуется использовать этот метод для первичной диагностики инфекции, изоляция вируса кори проводится в специализированных лабораториях.

Выявление РНК вируса методом ПЦР с обратной транскрипцией не получило пока широкого распространения. Секвенирование генома вируса кори применяется в целях определения генотипа возбудителя кори. Генетический анализ позволяет сравнивать штаммы, полученные из различных мест в разные годы, что позволяет получить информацию о происхождении вирусов и проследить пути их передачи.

Показания к применению различных лабораторных исследований. Для диагностики кори ВОЗ рекомендует использовать обнаружение вирус-специфических IgM методом ИФА в образце сыворотки крови, взятом после четвертого дня от момента появления сыпи. Взятие крови для исследований осуществляется на 4-7 день с момента появления сыпи.

При выявлении АТ IgМ к вирусу кори у пациентов с лихорадкой и пятнистопапулезной сыпью, обследуемых в рамках активного эпидемиологического надзора за корью, дополнительно проводится исследование для выявления АТ IgG методом ИФА в «парных сыворотках». Взятие крови для исследований осуществляется на 4-7 день с момента появления сыпи (1-я сыворотка) и не ранее чем через 10-14 дней от даты взятия первой пробы (2-я сыворотка).

Для определения напряженности иммунитета к вирусу кори ВОЗ рекомендует применять выявление АТ IgG в сыворотке крови методом ИФА.

Для выявления вируса кори и его РНК используют биоматериалы, взятые в продромальный период заболевания и в первые три дня после появления сыпи. При взятии образцов следует учитывать, что интенсивность экскреции вируса быстро падает.

Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Вирусоспецифические АТ IgM появляются в течение первых дней с момента высыпания, спустя месяц их уровень начинает быстро снижаться. Их наличие в крови пациента достоверно свидетельствует об острой свежей инфекции. АТ IgM также вырабатываются при первичной вакцинации и, хотя их уровень снижается быстрее, чем уровень АТ IgM, вырабатывающихся в ответ на инфицирование диким вирусом, специфические АТ IgM к дикому или вакцинному вирусу не могут быть разделены используемыми в рутинной диагностике методами. В этом случае для интерпретации полученных результатов следует обратиться к истории вакцинации конкретного пациента.

Поскольку исследование АТ IgM методом ИФА обладает максимальной чувствительностью между 4-м и 28-м днями от момента появления сыпи, то исследование образца крови, полученного в эти сроки, считается адекватным для диагностики кори. Повторное взятие образца крови может понадобиться в случае отрицательного результата выявления АТ IgM в первом образце крови, полученном в течение первых трех дней от момента появления сыпи. Повторное взятие крови для выявления АТ IgG выполняют через 10-14 дней после взятия первого. Нарастание титра специфических АТ IgG в 4 и более раза при одновременном исследовании обеих проб с использованием стандартных тестов является основанием для постановки диагноза «корь».

Вирус кори относится к семейству Morbillivirus семейства парамиксовирусов. Вирусная частица содержит РНК, окруженную белковым капсидом и внешней белково-липидной оболочкой. Вирус способен связываться с клетками, несущими рецептор комплемента CD46.

Корь – высококонтагиозное заболевание. Ранее, до повсеместной вакцинации, она была одной из самых распространённых детских инфекций (преимущественно среди детей дошкольного и школьного возраста). Передача вируса происходит воздушно-капельным путем. Первоначально вирус размножается в слизистой, что сопровождается умеренной виремией. Затем с кровью попадает в лимфоидную ткань, в которой активно размножается, особенно в моноцитах. После этого происходит широкое распространение вируса, совпадающее с продромальным периодом (повышение температуры, недомогание). В это время (9 – 10 сутки от момента заражения) вирус выявляется практически во всех тканях, особенно в эпителии дыхательных путей и лимфоидной ткани. Появляется кашель, насморк, конъюнктивит, повышается температура. В течение последующих 5 – 6 суток, больные наиболее заразны. Во время появления характерной сыпи (примерно на 14-е сутки) репродукция вируса снижается, к 16-м суткам вирус уже может не выявляться. В это время в крови выявляются специфические антитела. С появлением сыпи симптомы достигают максимума, наиболее тяжёлое состояние отмечается на 2 – 4 сутки, когда сыпь охватывает всё тело. Нередко сыпь сопровождается головной болью, рвотой, болями в животе, поносом и болями в мышцах.

Выраженное увеличение лимфоузлов и селезёнки, появляющееся в первые дни болезни, может сохраняться несколько недель. В острой стадии болезни и после исчезновения сыпи могут развиваться вторичные осложнения, связанные с инвазией гноеродных бактерий в дыхательные пути. Возможно развитие среднего отита или бронхопневмонии. Самые тяжёлые осложнения кори – поражения центральной нервной системы (панэнцефалит).

У переболевших корью людей развивается пожизненный иммунитет. Вакцинация живой противокоревой вакциной также обеспечивает стойкий иммунитет, инактивированной – на 6 – 18 месяцев. В зрелом возрасте иммунитет против кори (вследствие перенесённого заболевания или вакцинации) имеют практически все. Корь у беременных встречается редко, она может вызвать преждевременные роды, самопроизвольный аборт, мёртворождение. Однако пороков развития плода не наблюдается. Новорожденные дети у матерей, имеющих иммунитет против кори, защищены от инфекции материнскими антителами, прошедшими в их кровь через плаценту, вплоть до 6 – 7-месячного возраста после рождения. Начиная со второго полугодия жизни, восприимчивость детей к заболеванию растет.

Лабораторная диагностика. В случае затруднений в диагностике по клинической картине заболевания, целесообразно использование серологическох тестов (исследование уровня в крови IgM и IgG антител к вирусу кори – в лаборатории ИНВИТРО тесты № 251 и № 250). Неспецифическим лабораторным признаком кори является лейкопения со снижением абсолютного количества нейтрофилов и выраженным снижением числа лимфоцитов в продромальном периоде и периоде высыпаний (в лаборатории ИНВИТРО тесты № 5, № 119).

Антитела класса IgG к вирусу кори появляются вслед за антителами класса IgM примерно через 2 недели после инфицирования. В ходе дальнейшего развития иммунного ответа их концентрация быстро растёт. Специфические антитела в крови можно выявить практически у всех больных корью уже ко 2 дню появления сыпи. Антитела класса IgG сохраняются после перенесённого заболевания обычно пожизненно. IgG против вируса кори выявляются также и после вакцинации. По их присутствию в крови можно судить о наличии иммунитета к этому заболеванию. В крови новорожденных до 6 – 7 месячного возраста могут выявляться материнские IgG антитела, полученные через плаценту из крови матери в период беременности (IgM антитела через плаценту не проходят). При повторном контакте с вирусом у иммунных лиц наблюдается быстрый рост титров высокоспецифичных IgG, что обеспечивает защиту от инфекции (клинических проявлений и выделения вируса при этом не наблюдается).

Литература

1. Инфекционные болезни у детей. Ред. Д. Марри. М. Практика, 2006. 928 с.
2. Материалы фирмы – производителя реагентов.
3. Jacobs D. et al. Laboratory test handbook/ Lexi-Comp./2002 – 1534 p.
   

Комплексное исследование, направленное на диагностику кори, краснухи, эпидемического паротита, а также используемое для оценки эффективности вакцинации против данных заболеваний.

Синонимы русские

Вирусные инфекции дыхательных путей; корь, краснуха, эпидемический паротит; комплексная серологическая диагностика.

Синонимы английские

Viral respiratory tract infections; measles, rubella, mumps; comprehensive serological diagnostics.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Корь, краснуха и эпидемический паротит являются высококонтагиозными инфекционными заболеваниями дыхательных путей, в лабораторной диагностике которых большое значение имеет специфическая серологическая диагностика.

Корь представляет собой острую антропонозную вирусную инфекцию, поражающую детей, подростков и взрослых людей, и даже может являться причиной детской смертности. Возбудителем является РНКсодержащий вирус, относящийся к роду Morbilivirus семейства Paramyxoviridae. Инфекция передаётся преимущественно воздушно-капельным путём. Основные клинические проявления кори: лихорадка, ринит, ларингит, сухой кашель, конъюнктивит и экзантема. Экзантема при кори носит яркий характер, тенденцию к слиянию высыпных элементов, этапность распространения и угасания с области лица на шею, верхнюю часть груди, а далее на туловище и конечности. У 15-20 % людей, заболевших данным заболеванием, возможно развитие серьезных осложнений. К ним относятся стоматит, трахеит, пневмония, отит, энцефалит, менингит, менингоэнцефалит, энтерит, колит, пиелонефрит. При заболевании корью беременных женщин могут развиться осложнения в виде выкидыша или преждевременных родов.

Диагностика кори основана на клинико-эпидемиологических данных, результатах изменений в клиническом анализе крови, общем анализе и подтверждается лабораторными методами. В серологической лабораторной диагностике главным образом применяется выявление специфических антител к вирусу. Для подтверждения диагноза необходимо определение значительного нарастания титра антител в четыре и более раза в парных сыворотках, полученных от больного в остром периоде и в период реконвалесценции. Рекомендуется использовать обнаружение вирус-специфических IgM антител в сыворотке крови, взятой на 4-7-й день с момента появления сыпи. Уровень данных антител в течение нескольких дней увеличивается до максимума, а затем начинает постепенно снижаться в течение следующих недель. Поэтому рекомендуется дополнять серологическое обследование лиц с подозрением на корь определением антител класса IgG в крови, взятой на 4-7-й день с момента появления сыпи и на 10-14-й день от даты взятия первой пробы. Определение противокоревых IgG-антител применяется также для оценки развития иммунного ответа после вакцинации.

Краснуха – это вирусное антропонозное заболевание, вызванное РНКсодержащим вирусом семейства Togaviridae, рода Rubivirus. Источником инфекции является человек, больной манифестной или субклинической формой заболевания, а также новорождённый с врождённой формой краснухи в течение 1-6 месяцев. Инфекция передается от человека к человеку воздушно-капельным путем. К основным клиническим проявлениям краснухи относятся лихорадка, генерализованная лимфаденопатия, особенно с вовлечением заднешейных и затылочных лимфоузлов, мелкопятнистая сыпь, конъюнктивит, ринит, фарингит. Сыпь или экзантема при краснухе обычно возникает в первые три дня болезни на лице и шее, а затем в течение нескольких часов распространяется по всему телу в хаотичной последовательности. У взрослых людей также могут появляться миалгии и артралгии, часто заболевание может осложняться пневмонией, отитом, энцефалитом, менингоэнцефалитом.

Важно отметить опасность заражения вирусом краснухи беременных женщин, особенно в первый триместр беременности. В этом случае он может послужить причиной выкидыша, рождения мертвого плода и/или развития клинической картины врождённой краснухи – группы серьёзных пороков развития, которые могут вызвать глухоту, катаракту, пороки сердца, гепатит, микроцефалию, признаки прогрессирующего нарушения деятельности центральной нервной системы.

Диагностика краснухи основывается на комплексном подходе с учетом клинических, эпидемиологических данных и результатах лабораторного обследования. Серологическое обследование включает в себя количественное выявление антител классов IgM и IgG к вирусу краснухи.  Выявление IgM-антител свидетельствует о свежем, первые 2-3 недели, инфицировании вирусом. Присутствие в крови антител класса IgM, вне зависимости от наличия IgG, у ребенка или взрослого указывает на недавнее инфицирование вирусом краснухи. Обнаружение антител класса IgG может свидетельствовать о перенесенной или текущей краснухе, наличии иммунного ответа к вирусу краснухи, сформировавшегося после перенесенного заболевания, в результате проведенной вакцинации или при передаче антител от матери плоду в течение беременности. Обнаружение в крови беременной женщины возрастания титров антител в четыре и более раза или появление антител во второй парной сыворотке, а также специфических IgM или высоких титров IgG свидетельствует об инфицировании ее вирусом и о возможном риске поражения вирусом плода.

Эпидемический паротит является острой вирусной антропонозной инфекцией, вызванной РНКсодержащим Mumps вирусом семейства Coronaviridae, передающимся воздушно-капельным путем. Является преимущественно детской инфекцией, причём мальчики болеют чаще девочек. Оно характеризуется лихорадкой, интоксикацией, воспалением слюнных желез, поражением других железистых органов (поджелудочной железы, половых желез) и нервной системы. Возможно развитие специфических осложнений: серозного менингита, менингоэнцефалита, панкреатита, воспаления яичек (орхита), эпидидимита, воспаления яичников (оофорита), поражения органа слуха, миокардита, артритов.

Диагностика заболевания основывается на данных эпидемиологического анализа с выявлением возможного контакта, специфических клинических проявлениях. В клиническом анализе крови возможно выявление лейкопении, относительного лимфоцитоза.

Серологическая диагностика эпидемического паротита основана на выявлении нарастания титра специфических антител в парных сыворотках, взятых в первые дни болезни и через две недели от ее начала. Обнаружение в крови специфических антител класса IgM указывает на начальную стадию заболевания, в сочетании с повышением IgG свидетельствует о текущей инфекции, выздоровлении или недавнем инфицировании вирусом. Определение антител класса IgG применяется для оценки развития иммунного ответа в результате текущего или недавно перенесенного эпидемического паротита, а также в результате вакцинации.

Для чего используется исследование?

• Для комплексной лабораторной диагностики кори, краснухи, эпидемического паротита;
• для дифференциальной диагностики острых вирусных инфекций дыхательных путей при подозрении на корь, краснуху или эпидемический паротит;
• для подтверждения текущей или перенесенной инфекции, особенно при подозрении на бессимптомное течение или при отсутствии типичных клинических признаках заболеваний;
• для оценки эффективности вакцинации против кори, краснухи, эпидемического паротита;
• для определения титра антител против краснухи у беременных женщин или у женщин, планирующих беременность;

Когда назначается исследование?

• При клинических проявлениях и подозрении на корь;
• при клинических проявлениях и подозрении на краснуху;
• при клинических проявлениях и подозрении на эпидемический паротит;
• при обследовании лиц, находившихся в тесном контакте с больными корью, краснухой, эпидемическим паротитом;
• при оценке эффективности вакцинации против кори, краснухи, эпидемического паротита.

Что означают результаты?

Референсные значения

1. [07-033] Вирус кори, IgG (Measles Virus, IgG)

Результат: отрицательный.

Концентрация: 0 – 0,12 МЕ/мл.

2. [07-040] Rubella Virus, IgG (количественно)

Результат: отрицательный.

Концентрация: 0 – 10 МЕ/мл.

3. [07-042] Rubella Virus, IgM

Отношение S/CO (signal/cutoff): 0 – 0,8.

Результат: отрицательный.

4. [07-096] Mumps Virus, IgM

Результат: отрицательный.

5. [07-097] Mumps Virus, IgG

Результат: отрицательный.

Причины повышения:

• текущее или перенесенное заболевание корью, краснухой, эпидемическим паротитом;
• антитела класса IgM против вируса кори: острое заболевание корью;
• антитела класса IgG против вируса кори: текущее или перенесенное заболевание, наличие иммунного ответа после перенесенного заболевания или в формировние его в результате вакцинации;
• антитела класса IgM против вируса краснухи: острое заболевание краснухой, у новорождённых – внутриутробное инфицирование;
• антитела класса IgG против вируса краснухи: свидетельство о перенесенной или текущей краснухе, наличии иммунного ответа к вирусу краснухи, сформировавшегося после перенесенного заболевания, в результате проведенной вакцинации или при передаче антител от матери плоду в течение беременности;
• антитела класса IgM против вируса эпидемического паротита: изолированное, без сопутствующего повышения IgG – указывает на начальную стадию заболевания, в сочетании с повышением IgG – свидетельствует о текущей инфекции, выздоровлении или недавней инфекции;
• антитела класса IgG против вируса эпидемического паротита: текущий или недавно перенесенный эпидемический паротит, иммунитет вследствие ранее перенесенной инфекции или вакцинации;
• иммунный ответ после вакцинации.

Причины отрицательного результата / понижения:

• отсутствие кори, краснухи или эпидемического паротита;
• отсутствие или снижение иммунного ответа;
• ранние сроки инфицирования вирусом;
• неэффективно проведенная вакцинация против кори, краснухи или эпидемического паротита;
• снижение иммунологического ответа после вакцинации;
• ложноотрицательные результаты.

Что может влиять на результат?

• Клинический период заболевания, возраст пациента, наличие предшествующей вакцинации;
• особенности иммунного ответа у новорождённых детей;
• предшествующая вакцинация.



Важные замечания

• При интерпретации результатов обследования необходимо учитывать возраст пациентов, клиническую стадию (период) заболевания, предшествующую вакцинацию;
• для комплексной оценки полученных результатов их необходимо сопоставлять с эпидемиологическими, клиническими и другими лабораторными данными.

Также рекомендуется

[02-029] Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с микроскопией мазка крови при выявлении патологических изменений)

[02-006] Общий анализ мочи с микроскопией осадка

Кто назначает исследование?

Инфекционист, педиатр, пульмонолог, оториноларинголог, гинеколог, терапевт, врач общей практики.

Литература

1. Покровский В.И., Творогова М.Г., Шипулин Г.А. Лабораторная диагностика инфекционных болезней. Справочник / М. : БИНОМ. – 2013.
2. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни / М.: Медицина. – 2005. – 696 с.
3. Fauci, Braunwald, Kasper, Hauser, Longo, Jameson, Loscalzo Harrison’s principles of internal medicine, 17th edition, 2009.
4. Kanamori H, Tokuda K, Ikeda S, Endo S, Ishizawa C, Hirai Y, Takahashi M, Aoyagi T, Hatta M, Gu Y, Yano H, Weber DJ, Kaku MPrevaccination antibody screening and immunization program for healthcare personnel against measles, mumps, rubella, and varicella in a Japanese tertiary care hospital / Tohoku J Exp Med // 2014;234(2):111-6.