Анализ на авидность краснухи инвитро

Краснуха (Rubella) входит в группу репродуктивно значимых инфекций, обозначаемых как TORCH-комплекс (название образовано начальными буквами в латинских наименованиях – Toxoplasma, Rubella, Cytomegalovirus, Herpes); первичное инфицирование данными возбудителями, либо обострение уже имеющейся хронической инфекции из этой группы во время беременности является потенциально опасным для развития плода. По возможности, обследование на TORCH-инфекции (и на краснуху, в частности) целесообразно проходить за 5-6 месяцев до планируемой беременности, чтобы иметь представление о состоянии иммунитета по отношению к ним, при необходимости провести лечение, либо обеспечить профилактику (для краснухи – вакцинацию до беременности) и контроль. Обследование на TORCH-комплекс входит в план обследования женщин в период беременности.

Подтверждение или исключение факта недавнего инфицирования особенно важно при обследовании беременных женщин, поскольку именно при первичном инфицировании во время беременности высок риск вертикальной передачи инфекции и развития патологии плода. Использование авидности IgG-антител в качестве индикатора срока первичного инфицирования в настоящее время введено в практику серологических исследований на TORCH-инфекции.

Авидность (лат. – avidity) – характеристика прочности связи специфических антител с соответствующими антигенами (определяется числом связывающих участков и силой связывания). В ходе иммунного ответа организма на проникновение инфекционного агента стимулированный клон лимфоцитов начинает вырабатывать сначала специфические IgM-антитела, а несколько позже и специфические IgG-антитела. IgG-антитела обладают поначалу низкой авидностью. Затем развитие иммунного процесса постепенно (это могут быть недели или месяцы) идёт в сторону синтеза лимфоцитами высокоавидных IgG-антител, более прочно связывающихся с соответствующими антигенами и, соответственно, более надежно их элиминирующих. Высокая авидность специфических IgG-антител позволяет исключить недавнее первичное инфицирование. 

В основе теста на авидность IgG антител лежит метод дифференциации высоко- и низкоавидных антител с помощью обработки комплексов антиген-антитело раствором, вызывающим денатурацию белка. После такого воздействия связь низкоавидных антител с антигеном нарушается, а высокоавидных – сохраняется. Авидность IgG-антител в пробе оценивают с помощью расчетного показателя – индекса авидности, который представляет собой отношение результата определения концентрации IgG-антител, включающего стадию обработки диссоциирующим раствором, к результату измерения концентрации IgG-антител без такой обработки.

Клинические симптомы краснухи бывают выражены по-разному, часто инфекция протекает субклинически и может быть диагностирована только с помощью лабораторных методов исследования. Бессимптомное течение инфекции у беременных не снижает вероятность инфицирования плода. Комплекс доступных в ИНВИТРО методов серологической диагностики краснухи включает количественное определение специфических IgM (тест № 85), специфических IgG (тест № 84) к вирусу краснухи, иммуноблот IgG антител (тест № 1142), определение индекса авидности специфических IgG антител. См. также ПЦР-исследование ДНК вируса в крови (тест № 338).

Средний инкубационный период краснухи длится 14-18 дней. Иммуноглобулины класса М могут быть обнаружены уже на 1-3 день после появления клинических признаков заболевания, их концентрация достигает максимального значения через 7–10 суток, и, при типичном течении инфекции, они исчезают через 4–5 недель. IgG появляются на 2–3 дня позже, их концентрация достигает максимума через 4–5 недель и остается на высоком уровне длительное время. ДНК вируса может выявляться за неделю до появления сыпи, после исчезновения сыпи вирус в крови обычно не выявляется.

Лабораторными признаками первичной инфекции вирусом краснухи – если не было недавней вакцинации – является выявление IgM антител, появление ранее отсутствовавших IgG антител (сероконверсия), 4-х кратный и более прирост уровня IgG антител в динамике за 10-14 дней. Обнаружение при скрининговом обследовании одновременно и IgM, и IgG антител может быть свидетельством недавнего первичного инфицирования, поскольку IgM антитела обычно исчезают через 2-3 месяца от начала инфекционного процесса (длительность индивидуально варьирует). Но специфичность даже лучших коммерческих тест-систем для обнаружения IgM-антител не абсолютна. В некоторых ситуациях, как следствие очень высокой чувствительности тестов, возможны неспецифические ложноположительные результаты (такие интерференции нередки среди беременных). Случаи реинфекции вирусом краснухи после ранее перенесенной краснухи либо после вакцинирования – крайне редки. Наряду с изучением сведений об иммунном статусе (вакцинации, перенесенном заболевании), недавних контактов (экспозиции к вирусу), клинических признаков – в подобной ситуации помогают дополнительные лабораторные исследования (исследование авидности IgG антител, иммуноблот IgG антител). Выявление в крови высокоавидных IgG антител позволяет исключить недавнее первичное инфицирование.

Низкоавидные IgG-антитела при краснухе в среднем, выявляются до 3-4 месяцев от начала инфекции, но иногда вырабатываются и в течение более длительного срока. Само по себе выявление низкоавидных IgG-антител не является безусловным подтверждением факта свежего инфицирования, но служит дополнительным подтверждающим свидетельством в ряду остальных серологических тестов. Следует иметь в виду, что у новорожденных и грудных детей в период до полугода и более в крови присутствуют пассивно приобретенные IgG материнского происхождения, поэтому интерпретация результатов исследования IgG и их авидности в этом возрасте затруднительна. В этих случаях, помимо исследования IgM/IgG антител, целесообразно использование ПЦР-тестов на присутствие ДНК вируса.

Краснуха (Rubella) входит в группу репродуктивно значимых инфекций, обозначаемых как TORCH-комплекс (название образовано начальными буквами в латинских наименованиях – Toxoplasma, Rubella, Cytomegalovirus, Herpes); первичное инфицирование данными возбудителями, либо обострение уже имеющейся хронической инфекции из этой группы во время беременности является потенциально опасным для развития плода. По возможности, обследование на TORCH-инфекции (и на краснуху, в частности) целесообразно проходить за 5-6 месяцев до планируемой беременности, чтобы иметь представление о состоянии иммунитета по отношению к ним, при необходимости провести лечение, либо обеспечить профилактику (для краснухи – вакцинацию до беременности) и контроль. Обследование на TORCH-комплекс входит в план обследования женщин в период беременности.

Подтверждение или исключение факта недавнего инфицирования особенно важно при обследовании беременных женщин, поскольку именно при первичном инфицировании во время беременности высок риск вертикальной передачи инфекции и развития патологии плода. Использование авидности IgG-антител в качестве индикатора срока первичного инфицирования в настоящее время введено в практику серологических исследований на TORCH-инфекции.

Авидность (лат. – avidity) – характеристика прочности связи специфических антител с соответствующими антигенами (определяется числом связывающих участков и силой связывания). В ходе иммунного ответа организма на проникновение инфекционного агента стимулированный клон лимфоцитов начинает вырабатывать сначала специфические IgM-антитела, а несколько позже и специфические IgG-антитела. IgG-антитела обладают поначалу низкой авидностью. Затем развитие иммунного процесса постепенно (это могут быть недели или месяцы) идёт в сторону синтеза лимфоцитами высокоавидных IgG-антител, более прочно связывающихся с соответствующими антигенами и, соответственно, более надежно их элиминирующих. Высокая авидность специфических IgG-антител позволяет исключить недавнее первичное инфицирование. 

В основе теста на авидность IgG антител лежит метод дифференциации высоко- и низкоавидных антител с помощью обработки комплексов антиген-антитело раствором, вызывающим денатурацию белка. После такого воздействия связь низкоавидных антител с антигеном нарушается, а высокоавидных – сохраняется. Авидность IgG-антител в пробе оценивают с помощью расчетного показателя – индекса авидности, который представляет собой отношение результата определения концентрации IgG-антител, включающего стадию обработки диссоциирующим раствором, к результату измерения концентрации IgG-антител без такой обработки.

Клинические симптомы краснухи бывают выражены по-разному, часто инфекция протекает субклинически и может быть диагностирована только с помощью лабораторных методов исследования. Бессимптомное течение инфекции у беременных не снижает вероятность инфицирования плода. Комплекс доступных в ИНВИТРО методов серологической диагностики краснухи включает количественное определение специфических IgM (тест № 85), специфических IgG (тест № 84) к вирусу краснухи, иммуноблот IgG антител (тест № 1142), определение индекса авидности специфических IgG антител. См. также ПЦР-исследование ДНК вируса в крови (тест № 338).

Средний инкубационный период краснухи длится 14-18 дней. Иммуноглобулины класса М могут быть обнаружены уже на 1-3 день после появления клинических признаков заболевания, их концентрация достигает максимального значения через 7–10 суток, и, при типичном течении инфекции, они исчезают через 4–5 недель. IgG появляются на 2–3 дня позже, их концентрация достигает максимума через 4–5 недель и остается на высоком уровне длительное время. ДНК вируса может выявляться за неделю до появления сыпи, после исчезновения сыпи вирус в крови обычно не выявляется.

Лабораторными признаками первичной инфекции вирусом краснухи – если не было недавней вакцинации – является выявление IgM антител, появление ранее отсутствовавших IgG антител (сероконверсия), 4-х кратный и более прирост уровня IgG антител в динамике за 10-14 дней. Обнаружение при скрининговом обследовании одновременно и IgM, и IgG антител может быть свидетельством недавнего первичного инфицирования, поскольку IgM антитела обычно исчезают через 2-3 месяца от начала инфекционного процесса (длительность индивидуально варьирует). Но специфичность даже лучших коммерческих тест-систем для обнаружения IgM-антител не абсолютна. В некоторых ситуациях, как следствие очень высокой чувствительности тестов, возможны неспецифические ложноположительные результаты (такие интерференции нередки среди беременных). Случаи реинфекции вирусом краснухи после ранее перенесенной краснухи либо после вакцинирования – крайне редки. Наряду с изучением сведений об иммунном статусе (вакцинации, перенесенном заболевании), недавних контактов (экспозиции к вирусу), клинических признаков – в подобной ситуации помогают дополнительные лабораторные исследования (исследование авидности IgG антител, иммуноблот IgG антител). Выявление в крови высокоавидных IgG антител позволяет исключить недавнее первичное инфицирование.

Низкоавидные IgG-антитела при краснухе в среднем, выявляются до 3-4 месяцев от начала инфекции, но иногда вырабатываются и в течение более длительного срока. Само по себе выявление низкоавидных IgG-антител не является безусловным подтверждением факта свежего инфицирования, но служит дополнительным подтверждающим свидетельством в ряду остальных серологических тестов. Следует иметь в виду, что у новорожденных и грудных детей в период до полугода и более в крови присутствуют пассивно приобретенные IgG материнского происхождения, поэтому интерпретация результатов исследования IgG и их авидности в этом возрасте затруднительна. В этих случаях, помимо исследования IgM/IgG антител, целесообразно использование ПЦР-тестов на присутствие ДНК вируса.